坚果中吡虫啉及啶虫脒含量测定方法探究

刘 畅1，赵新宇2

(1.鞍山市检验检测认证中心 食药所，辽宁鞍山 114000;

2.辉山乳业(沈阳)销售有限公司研发部，辽宁沈阳 110000)

摘 要：为建立准确、快速检测坚果中吡虫啉和啶虫脒含量测定方法，样品采用QuEChERS方法进行提取、净化，经液相色谱-质谱/质谱仪检测、外标法定量。其线性范围为：吡虫啉55～1 000 ng/mL，啶虫脒1.0～100.0 ng/mL，相关系数均大于0.998，检出限分别为5.50 μg/kg和3.0 μg/kg，定量限分别为11.0 μg/kg和10.0 μg/kg，加标回收率为64%～113%，相对标准偏差小于14%。

关键词：坚果;吡虫啉;啶虫脒;QuEChERS方法

随着我国人们生活水平的不断提高，人们对食品安全越来越关注，农药残留问题是关注的焦点之一。植物性食品农药残留除直接来源于农药喷洒外，还来源于土壤和水，农药残留污染是阻碍我国农业可持续发展的重要原因，完善现有的农药残留检测技术，建立健全农药使用管理制度是保护人们身体健康，保护土壤和水生态环境的重要手段。

吡虫啉属于烟碱类超高效杀虫剂，可广泛应用于花生、小麦、水稻、蔬菜等作物。啶虫脒属于氯化烟碱类新型杀虫剂，对有机磷、氨基甲酸酯以及拟除虫菊酯类等农药产生抗药性的害虫具有较好效果，可防治花生、烟草、棉花等作物的蚜虫[1-2]。《食品安全国家标准 食品中农药最大残留限量》(GB 2763—2021)规定，植物源性食品坚果吡虫啉最大残留限量为0.01 mg/kg，坚果啶虫脒最大残留限量为0.06 mg/kg[3]。

1 材料与方法

1.1 材料与设备

市售花生米、榛子;甲酸(色谱纯，天津市科密欧化学试剂有限公司);乙酸铵(优级纯，上海阿拉丁生化科技股份有限公司);甲醇(色谱纯，Fisher，美国制造);乙酸(色谱纯，天津市科密欧化学试剂有限公司);乙腈(色谱纯，Fisher，美国制造); ESI-L低浓度混合调谐液(安捷伦));QuEChERS 萃取盐包(深圳逗点生物技术有限公司);QuEChERS 净化管(深圳逗点生物技术有限公司);吡虫啉标准物质(100 μg/mL，农业部环境保护科研监测所);啶虫脒标准物质(100 μg/mL，农业部环境保护科研监测所)

1260-6460液相-质谱联用仪配SB-C18 RRHD (2.1 mm×100 mm，1.8 μm)色谱柱(美国安捷伦科技有限公司);T-203电子天平(赛多利斯);101-1AB 涡旋混合仪(天津市泰斯特仪器有限公司);R206超声仪(上海申生科技有限公司);NS-10氮吹仪(上海屹尧仪器科技发展有限公司);ALLEGRA X-30离心机(BECKMAN，美国制造)。

1.2 实验方法

1.2.1 设备参数

柱温：35 ℃;流动相A：0.1%(V/V)甲酸甲醇(含5 mmol/L乙酸铵)，流动相B：0.1%(V/V)甲酸水(含5 mmol/L乙酸铵)，梯度洗脱：0～1 min，95%B;1～6 min，60%B;6～34 min，0%B;34～38 min，0%B;38.1 min，95%B;流速0.2 mL/min;进样量：10 µL。

离子源：AJS;扫描方式：正离子扫描;反应监测模式：MRM;干燥气温度：300 ℃;干燥气流速：11 L/min;鞘气温度：350 ℃;鞘气流速：11 L/min;喷雾气压力：25 psi;毛细管电压：4 000 V。质谱的其他参数见表1。

1.2.2 样品处理

(1)市售花生米。称取粉碎后混合均匀的10 g样品于50 mL离心管中，加入20 mL 1%乙酸乙腈，超声提取15 min。加QuEChERS萃取盐包于离心管中，涡旋 1 min，以8 000 r/min离心5 min。取全部上清液入QuEChERS净化管中，涡旋1 min，以8 000 r/min离心5 min，转移上清液，40 ℃氮吹至近干，用初始流动相定容至1 mL，涡旋混匀，经0.22 μm微孔滤膜过滤后备用，同时做基质空白[4-6]。

(2)市售榛子。称取去壳粉碎后混合均匀的5 g样品于50 mL离心管中，加入5 mL 1%乙酸乙腈溶液，超声提取15 min。加QuEChERS萃取盐包于离心管中，涡旋1 min，以8 000 r/min离心5 min，将上清液转移至10 mL容量瓶中。向装有试样的离心管中，再加入5 mL 1%乙酸乙腈溶液，重复上述操作，合并提取液，用乙腈定容至10 mL，混匀。移取上述提取液4.5 mL至净化管中，涡旋混匀，以8 000 r/min离心5 min，取上清液600 μL，用初始流动相定容

3 mL，涡旋混匀，经0.22 μm微孔滤膜过滤后备用，同时做基质空白。

1.2.3 标准溶液配制

分别移取100 μg/mL吡虫啉、啶虫脒储备液适量体积，用空白基质稀释成浓度为10 μg/mL的中间液，再用初始流动相稀释成系列标准溶液，临用现配。

1.2.4 定性测定

根据待测样品目标物保留时间、所选离子相对丰度比(Ratio)与标准物质是否一致来判断待测样品中是否存在目标物。保留时间±5%;相对丰度>50%，允许±20%偏差;相对丰度>20%～50%，允许±25%偏差;相对丰度>10%～20%，允许±30%偏差。

1.2.5 定量测定

以基质混合标准工作液浓度为横坐标、峰面积为纵坐标绘制曲线，外标法定量。

2 结果与分析

采用梯度洗脱方式有效分离开吡虫啉和啶虫脒，见图1;配制基质混合标准溶液使得在扣除背景后目标离子得以出现，见图2;在55～1 000 ng/mL范围内，吡虫啉标准曲线为y=103.248 239x-1 277.036 977，相关系数R2=0.998 6，见图3;在1.0～100.0 ng/mL范围内，啶虫脒标准曲线为y=11 218.377 831-23 553.253 060，相关系数R2=0.997 3，见图3。

采用阴性坚果样品，进行加标试验，测得吡虫啉检出限为5.50 μg/kg、定量限为11.0 μg/kg;啶虫脒检出限为3.0 μg/kg，定量限为10.0 μg/kg;在5.50～55 μg/kg，吡虫啉回收率为64%～101%，精密度为3%～14%;在10.0～60.0 μg/kg，啶虫脒回收率为93%～113%，精密度为3%～10%，详见表2。

3 结论

通过本研究得出液相色谱-串联质谱法能有效分离、定性和定量坚果中吡虫啉和啶虫脒，前处理采用QuEChERS方法操作简单、去除坚果脂肪效果明显、回收率高，解决了传统方法多次旋转蒸发、多次氮吹的耗时耗力且回收率低的困扰。

参考文献

[1]中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局,中国国家标准化管理委员会.水果和蔬菜中450种农药及相关化学品残留量的测定 液相色谱-串联质谱法:GB/T 20769—2008[S].北京:中国标准出版社,2008.

[2]中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局,中国国家标准化管理委员会.水果、蔬菜中啶虫脒残留量的测定 液相色谱-串联质谱法:GB/T 23584—2009[S].北京:中国标准出版社,2009.

[3]国家卫生健康委员会,农业农村部,国家市场监督管理总局.食品安全国家标准 食品中农药最大残留限量:GB 2763—2021[S].北京:中国标准出版社,2021.

[4]朱之桐，柳菡,宁倩倩,等.高效液相色谱-串联质谱法测定蜂蜜中9种农药残留[J].色谱,2019,37(1):8-14.

[5]程群，林碧芬,黄萍,等.LC-MS/MS测定茶叶中吡虫啉和啶虫脒残留量[J].福建轻纺,2009(10):49-51.

[6]王骏，钟青,郭忠成,等.烟草中啶虫脒、吡虫啉残留量的UPLC-MS/MS测定[J].烟草科技,2010(10):41-43.