气相色谱-质谱法测定曼陀罗药酒中莨菪碱的含量

□ 张秋萍 王春民 马晓艳 苏州市疾病预防控制中心

摘　要：本试验采用气相色谱-质谱法测定曼陀罗药酒中莨菪碱的含量，样品经浓度为2mol/L的盐酸溶液提取后超声处理，上清液以浓氨水调至pH=9后用三氯甲烷液-液萃取后氮吹至近干，残渣用三氯甲烷溶解，然后用气质联用仪分离测定;采用电子电离源(EI)模式电离，单离子选择(SIR)监测方式检测。结果显示，该方法的线性范围为100~1000μg/L，线性回归方程为Y=85.6X-4.638，r=0.999，样品最低定量浓度(LOQ)为0.01mg/kg，在0.05~5.0mg/kg添加水平下回收率为82%~94%，相对标准偏差(RSD)为4.9%~7.4%。故得出结论，本方法准确度高且重复性好，能够用于曼陀罗药酒中莨菪碱含量的快速测定。

关键词：气相色谱质谱仪 莨菪碱 曼陀罗

曼陀罗又名洋金花、风茄儿，系一年生茄科草本植物，我国各省区均产，其根叶果实皆可入药。曼陀罗全株都有毒，且以果实毒性最大(主要成分为莨菪碱、东莨菪碱等)，中毒的临床表现类似阿托品中毒。曼陀罗中毒的潜伏期短则20分钟、长则3小时，多为1小时左右病发，症状先有唇干口渴、嗓子发苦、吞咽困难、声音嘶哑、皮肤干燥潮红、发热等，继而有头晕、瞳孔散大、视力模糊等，甚至出现幻听幻视，严重者心率加快、躁动不安、血压不稳、惊厥、昏迷，更有甚者会因呼吸衰竭而死亡[1]。

现行药典规定了莨菪碱的液相色谱法(HPLC)[2]，但该方法仅适用于药材，尚不能满足食品基质中莨菪碱的检测。本文采用气相色谱-质谱法测定曼陀罗药酒中莨菪碱的含量，以期开发误食曼陀罗药酒引起中毒的快速定性定量检测方法。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

1.1.1 仪器

气相色谱质谱仪：TRACE GC ULTRA/ISQ,Thermo公司，台式离心机。

1.1.2 试剂

浓氨水，分析纯;盐酸，优级纯;甲醇，色谱纯;三氯甲烷，色谱纯。

1.1.3 标准品

莨菪碱，莨菪碱标准储备液(1000mg/L)：精确称取10.0mg(精确到0.1mg)莨菪碱标准品置于10mL容量瓶中，用甲醇作溶剂溶解，定容，混匀，于4℃避光保存。

1.2 方法

1.2.1 提取与净化

称取1g(精确至0.01g)样品试样置于50mL离心管中，加入浓度为2mol/L的盐酸溶液10mL，超声处理30min，冷却，高速离心，倒出上清液。用浓度为2mol/L的盐酸溶液10mL洗涤残渣，高速离心，合并上清液。用浓氨水将上清液调至pH=9，倒入分液漏斗，用三氯甲烷振荡提取3次，每次10mL，合并三氯甲烷并氮吹至近干，残渣用三氯甲烷溶解并定容，然后上机测定。

1.2.2 实验条件

色谱柱：HP-5MS柱，60m×0.250mm×0.25Micro。

柱温：80℃、保持1min，以20℃/min的速度升到220℃、保持1min，然后以10℃/min的速度升到270℃、保持10min，总体运行时间为24分钟。进样口温度：250℃;流量：1.0/min;进样量：1.0μL。

质谱条件：Full scan质谱扫描范围：50~650m/z，离子源温度：280℃，接口温度：250℃，SIM模式：定量离子124m/z;定性离子82，94m/z。

2 结果

2.1 分析方法

目前，测定曼陀罗中莨菪碱含量的方法主要有高效液相色谱法、薄层色谱法、气相色谱法、毛细管电泳法、离子对色谱法等。近年来，医药行业主要采用高效液相色谱法(HPLC)测定曼陀中莨菪碱的含量[3]，但是该方法灵敏度较差，对流动相的要求比较繁琐。本研究建立GC-MS方法用于测定曼陀罗药酒中莨菪碱的含量。由于莨菪碱为典型的生物碱类，如按照传统生物碱的提取方法，色谱图会出现较多杂峰且分离度并不理想。本实验采用酸提取，上清液氨化后进行三氯甲烷液-液萃取，不仅提取回收率高，色谱图也比较简单，故该方法适合用于曼陀罗药酒中莨菪碱的提取与分离。

2.2 方法学评价

2.2.1 线性范围及检出限实验

将莨菪碱标准储备液逐级稀释得到浓度分别为100、250、500、750、1000μg/L的标准工作液，浓度由低到高进样检测，以定量子离子峰面积-浓度作图，得到标准曲线回归方程，外标法定量。待测样液中莨菪碱的响应值应在标准曲线线性范围内，超过线性范围则应稀释后再进样分析。由此得出结论，该方法的线性范围为100~1000μg/L，线性回归方程为Y=85.6X-4.638，r=0.999，以信噪比(S/N)为3时对应的含量作方法的检出限(LOD)，以S/N=10对应的含量作方法的定量限(LOQ)为0.01mg/kg。在50~5000μg/kg添加水平下回收率为82%~94%，相对标准偏差(RSD)为4.9%~7.4%。

图 1 阳性样品图谱

2.3 样品测定结果

某地发生一起5人突发中毒事件，主要症状均为谵妄、狂躁、恶心呕吐等，部分中毒患者处于昏迷和意识不清状态。食物暴露调查显示，5人与其他参加丧宴人员的食谱均相同，仅在就餐时饮用了存放在2楼的自制药酒。据观察，泡药酒的草药中有些与曼陀罗的果实十分相似，流调人员从后院菜地收割的曼陀罗植株中采集2枚果实，从剩余的药酒罐中采集200mL左右的药酒，经实验室检测发现果实中的莨菪碱含量为650mg/kg;药酒中的莨菪碱含量为300mg/L。依据实验室检测结果，结合中毒患者的临床表现与流行病学调查以及检验结果，判断该起中毒事件是一起丧宴中误服药酒导致的5人曼陀罗(莨菪碱)中毒事件，阳性样品图谱见图1。

3 结论

本文采用气相色谱-质谱法测定曼陀罗药酒中莨菪碱的含量，方法的准确度及精密度均符合分析要求，可适用于固体、液体食品中莨菪碱的定性确证与定量测定。

参考文献：

[1] 陈静，张凤，张锐，李卿，等.LC-MS/MS法测定毛曼陀罗中莨菪碱、东莨菪碱和山莨菪碱的含量[J].井冈山大学学报(自然科学版)2019，40(4)：92-95.

[2] 崔雅慧，金志国等.高效液相色谱法测定止喘灵注射液中盐酸麻黄碱、丁溴东莨菪碱和苦杏仁苷含量[J].中国药业,2020，29(13):71-73.

[3] 李红红，陈朋朋，付传香，吴泽宇，惠爱玲，许坤，张文成，等.HPLC法同步测定洋金花中东莨菪碱和莨菪碱的含量[J].安徽化工，2018，44(5):92-94.

作者简介：张秋萍(1979.10-)，女，汉族，学士学位，高级工程师，主要从事食品理化分析工作。