液相色谱-原子荧光法测定水产食品中的甲基汞

李鹏飞

(山西省食品药品检验所，山西太原 030031)

摘　要：本文参照GB 5009.17—2014，建立了液相色谱-原子荧光法(LC-AFS)测定水产食品中甲基汞的检测方法。实验表明，在0.5～10.0 ng/mL，甲基汞的峰面积与浓度线性关系较好，相关系数为0.996 5，方法检出限为0.006 mg/kg，加标回收率为85.7%～98.9%，为2.1%～3.5%，精密度与稳定性良好，可以满足水产食品中甲基汞的分析要求。

关键词：水产食品;甲基汞;液相色谱-原子荧光法

汞是一种具有生物蓄积性与持久性的剧毒物质[1]。在元素汞、无机汞与有机汞3种形态中，甲基汞的毒性最大，其易被人体吸收且难降解排出，对人体健康危害极大[2]。水生生物吸收水体中的汞，形态会随着水生食物链的传递发生转化并不断富集放大，鱼虾等水产食品成为人类摄入汞的主要风险来源，日本的水俣病事件即是甲基汞的食源性危害引发，所以加强对水产食品中甲基汞的风险评估非常重要[3-4]。目前，甲基汞形态的检测方法主要有GC-AFS法、LC-ICP-MS法、HPLC-CV-AFS法和LC-AFS法等，GC-AFS法衍生处理步骤烦琐，LC-ICP-MS法、HPLC-CV-AFS法成本较高，运行维护复杂，LC-AFS法前处理简单、分析成本低。因此，本文结合实验室条件设备，参照GB 5009.17—2014[5]中第二法建立了LC-AFS法测定水产食品中的甲基汞的方法。

1　材料与方法

1.1　材料与试剂

大虾(购自某超市);GBW08675甲基汞溶液标准物质、GBW(E)081524乙基汞溶液标准物质(均由中国计量科学研究院提供);甲醇为色谱纯;硝酸、盐酸、氢氧化钠、氢氧化钾、硼氢化钾、乙酸铵、-半胱氨酸盐酸均为分析纯;实验用水为一级超纯水。

1.2　仪器与设备

SA-20液相色谱仪，AFS-8230原子荧光光度计(北京吉天仪器);AR224CN电子天平(美国奥豪斯);超声波提取器;冷冻离心机等。

1.3　实验方法

准确称取均匀样品1 g于15 mL塑料离心管中，加入5 mol/L的盐酸溶液10 mL，放置过夜。于室温下超声水浴提取1 h，再于4 ℃的冷冻离心机中以8 000 r/min转速离心15 min。准确吸取2.0 mL上清液至10 mL刻度试管中，逐滴加入6 mol/L的氢氧化钠溶液调节样液pH为2～7。加入10 g/L的-半胱氨酸溶液0.1 mL，用超纯水定容至刻度，过0.45 μm有机系滤膜，上机待测，同时做空白试验。称取与试样处理相同的试样量，按照与试样处理相同的操作步骤进行空白试验。

1.3.1　标准溶液配制

(1)标准储备液配制。准确吸取1 mL甲基汞溶液标准物质用超纯水稀释定容至50 mL容量瓶中，配制成浓度为

1 000 ng/mL的甲基汞标准储备液。准确吸取1.31 mL甲基汞溶液标准物质用超纯水稀释定容至100 mL容量瓶中，配制成浓度为800 ng/mL的乙基汞标准储备液。

(2)标准工作系列配制。准确吸取0.2 mL甲基汞储备液(1 000 ng/mL)、0.25 mL乙基汞储备液(800 ng/mL)于10 mL容量瓶中，用流动相稀释定容，配制成甲基汞、乙基汞浓度均为20 ng/mL的混合标准溶液。分别吸取0.05 mL、0.10 mL、0.20 mL、0.40 mL、0.60 mL、0.80 mL和1.00 mL混合标准溶液至7支10 mL刻度管中，用流动相定容至2 mL，配制成浓度为0.5 ng/mL、1.0 ng/mL、2.0 ng/mL、4.0 ng/mL、6.0 ng/mL、8.0 ng/mL、10.0 ng/mL的混合标准工作系列溶液。

1.3.2　仪器参考条件

(1)液相色谱条件。色谱柱：C18分析柱(150 mm×4.6 mm，5 μm);C18预柱(10 mm×4.6 mm，5μm);流动相：5%甲醇+0.06 mol/L乙酸铵+0.1% -半胱氨酸;流速：1.0 mL/min;进样体积：100 μL。

(2)原子荧光条件。光电倍增管电压：285 V;原子化器高度：8 mm;灯电流：35 mA;载气流量：500mL/min。

2　结果与分析

2.1　线性范围及检出限

将配制的标准工作系列溶液在上述仪器条件下测定，以甲基汞标准系列点浓度为横坐标，对应的色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。甲基汞在0.5～10.0 ng/mL范围内线性关系较好，其曲线方程为=40 918-12 433，相关系数为0.996 5。以3倍信噪比(/=3)计算检出限为0.111 ng/mL，根据国标方法GB 5009.17—2014计算得此方法检出限为0.006 mg/kg，满足水产食品中甲基汞的分析要求。

2.2　回收率与重复性

准确称取18份阴性大虾样品，分别添加低、中、高3种浓度水平的标准溶液，按照上述试样处理与仪器条件将低、中、高各个浓度水平平行测定6次，计算方法的回收率与重复性，结果见表1。该方法的回收率为85.7%～98.9%，重复性为2.1%～3.5%。

2.3　精密度与稳定性试验

取浓度为10.0 ng/mL的混合标准工作溶液在上述仪器条件下连续测定6次，根据色谱峰面积计算得为4.8%，表明该方法精密度良好。取浓度为10.0 ng/mL的混合标准工作溶液，分别在0 h、12 h、24 h时上机测定，峰面积依次为648 857.0、672 194.1、638 807.4，表明该方法稳定性良好。

3　结论

本文参照GB 5009.17—2014，建立的LC-AFS法测定水产食品中甲基汞的检测方法，标准曲线的线性关系良好，方法的检出限、回收率、重复性与稳定性等符合相关标准规范的要求，能够满足实验室对水产食品中甲基汞的检测需求，可为市场监管部门加强鱼虾等水产食品中甲基汞风险监测提供技术支持。

参考文献

[1]曾庆文,江晖,李丹,等.利用AFS和LC-AFS测定鱼肉中的总汞与甲基汞[J].分析试验室,2015,34(11):1259-1262.

[2]肖亚兵,崔颖,陈文硕,等.液相色谱-原子荧光法测定鱼肉中有机汞形态[J].食品研究与开发,2014(21):120-122.

[3]姜帅,李学伟,秦秀荣,等.浅谈食品中甲基汞的测定[J].信息周刊,2019(5):473.

[4]李浩洋,汪海滨,邓建,等.LC-AFS法测定水产饲料中的甲基汞[J].食品工业,2019,40(4):322-325.

[5]中华人民共和国国家卫生健康委员会,国家市场监督管理总局.食品安全国家标准食品中总汞及有机汞的测定:GB 5009.17—2014[S].北京:中国标准出版社,2016.