高效液相色谱法测定熟肉制品中非法添加物红2G的不确定度评定

谢迎春1，李拥军1，苏玲玉2，侯言东1，骆 姗1，张 琳1

(1.甘肃省疾病预防控制中心，甘肃兰州 730000;
2.甘南州疾病预防控制中心，甘肃合作 747000)

摘 要：目的：采用高效液相色谱法测定熟肉制品中非法添加剂红2G的含量，对其结果进行不确定度分析。方法：依据标准《测量不确定评定与表示》(JJF 1059.1—2012)、《化学分析中不确定度的评估指南》(CNAS-GL006-2019)及《化学分析中不确定度的评估指南》(JJF 1135—2005)对整个过程建立合理的数学模型，并对测定不确定的来源进行分析和量化，从标准品、样品及重复性几个方面进行评定。结果：在95%的置信区间下，熟肉制品中非法添加剂红2G含量测定结果的扩展不确定度为1.097 mg/kg，含量测定结果为(9.71±1.097)mg/kg，(=2)。结论：利用最小平方法拟合红2G的标准曲线所产生的不确定度在整个测定过程中影响最大，即红2G标准曲线的浓度值是影响不确定度的主要因素，建议在配制标准曲线时，使用更精密的量器，并做好精密量器的校准。

关键词：不确定度;红2G;高效液相色谱法;熟肉制品

红2G ，又名食品红10或酸性红1，CAS号3734-67-6，国际编码E128，属于偶氮类合成色素，其颜色呈浅红色，可在食物原有色泽基础上添上桃红色，甚至更深的血红色，目前已有报道[1]测定红2G的主要方法有高效液相色谱法(HPLC)[2-4]和液相色谱-串联质谱法(LC-MS)[5-7]，由于该物质被人体摄入后能够分解出致癌物质苯胺，可能诱发癌症，所以在亚洲、欧洲[8]等地区的很多国家已经明确规定禁止在食品中使用。但是在我国海关以及市面上发现依然有部分食品中违规添加红2G的现象[9]，为更加精准地判定检测结果，需要借助不确定度对其检测过程中系统效应和随机效应进行修正。

测量不确定度是实验室中质量控制的需要，能有效降低实验过程中的风险因素，还可以反映结果正确性的可疑度，提高分析结果质量和准确性，已普遍用于国内外各类分析方法中[10-14]。根据目前有关红2G的评估研究，还没有发现对HPLC法测定熟肉制品中红2G含量进行不确定度评定的报道。本研究参考CNAS-GL006-2019[15]、JJF 1059.1—2012[16]和JJF 1135—2005，对高效液相色谱法测定熟肉制品中红2G含量的整体实验过程进行不确定度评定，建立科学合理的数学模型，对实验过程中不确定度来源进行分析，提高检验结果的准确性和科学性，为质量控制提供可靠依据。

1 材料和方法

1.1 试剂材料

Acid red 2G(含量90%，不确定度：0.5%，BePure公司);甲醇(色谱纯，德国Merck公司);亚铁氰化钾、乙酸锌、乙醇、氨水、石油醚、柠檬酸、聚酰胺粉(200～400目)和乙酸铵(均为分析纯，国药集团化学试剂有限公司);海砂(化学纯，天津市科密欧化学试剂有限公司)。

1.2 仪器设备

安捷伦1200高效液相色谱仪(美国安捷伦公司);ME204E电子天平(感量0.1 mg，梅特勒-托利多仪器公司);AB135-S电子天平(感量1 mg，梅特勒-托利多仪器公司);3-30KS高速冷冻离心机(Sigma仪器公司)。

1.3 实验方法

1.3.1 标准溶液的配制

精确称取红2G标准品10.0 mg，用水溶解并定容至

10 mL容量瓶，配制成1 mg/mL的标准储备液，取1 mL储备液用甲醇定容至10 mL容量瓶，为100 μg/mL标准工作液，吸取标准工作液至10 mL容量瓶稀释至标准系列浓度。

1.3.2 样品前处理方法

样品磨碎，取适量经过沉淀蛋白、提取色素、脱脂、洗脱色素，收集调节pH，过膜上机[17-18]。具体实验条件及过程较为复杂，在做不确定度评定时，统一归纳入样品回收率不确定度评定。

1.3.3 样品加标回收率实验前处理方法

取0.1 mg红2G标准加入样品，做6组平行样品，与样品同时进行前处理，过膜及上机，取其中一个加标试样重复上机测定6次。

1.3.4 仪器检测条件

色谱柱：Eclipse XDB-C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm);流速：1.0 mL/min;检测波长：530 nm;柱温：35 ℃;进样量：10 μL;流动相梯度洗脱程序见表1。

作者简介：谢迎春(1985—)，女，甘肃兰州人，硕士，主管技师。研究方向：理化检验。

通信作者：张琳(1986—)，女，甘肃兰州人，硕士，主管技师。研究方向：理化检验。