食品安全
导航

超高效液相色谱法测定茶叶中的儿茶素

2021-08-15 21:40:35 来源:

　　超高效液相色谱法测定茶叶中的儿茶素
　　
　　崔利辉 '.胡 娜 2，李璐琦
　　
　　（1.杨凌职业技术学院，陕西杨凌 712100;2.铜川市食品药品检验检测中心，陕西铜川727000;
　　
　　3.西北农林科技大学 生命科学大型仪器共享平台，陕西杨凌 712100）
　　
　　基金项目：2020年杨凌职业技术学院校内基金项目'‘食品中多种抗氧化剂的快速检测研究"（ZK20-61）。 作者简介：崔利辉（1987—）,男，汉族，陕西杨凌人，硕士，助教。研究方向：食品质量安全检测。
　　
　　摘 要：建立超高效液相色谱法测定茶叶中7种儿茶素类茶多酚，通过调整流动相乙<-0.1%甲酸溶液梯度，优化了 分离度，进行了加标回收试验，结果表明，在10 - 100 ug/mL范围内，7种儿茶素的峰面积呈现良好的线性关系，相关 系数不低于0. 999,检出限为6.1 ~ 97.8 mg/kg,加标回收率93. 1 ~ 96.8%,相对标准偏差在1. 7% ~ 3.3%。该方法具有 分析时间短，回收率、精密度高的优点。
　　
　　关键词∶超高效液相色谱;儿茶素;茶叶
　　
　　茶叶中富含多种营养成分『气有效成分的含量和种类 对茶叶的品质至关重要。茶叶中主要的抗氧化活性成分为 茶多酚伊勺，约占茶叶干重的20%〜30%。除此之外，茶 多酚还具有抗氧化、抗癌、抑菌、降压和降脂团等保健功 效。茶多酚主要包括黄酮类、黄酮醇、儿茶素类、黄青素 类、酚酸类等物质，其中儿茶素类含量最高，占茶多酚的 60%〜80%。儿茶素回包括儿茶素、表儿茶素、表没食子 儿茶素没食子酸酯、表儿茶素没食子酸酯、表没食子儿茶素、 没食子酸和咖啡因等。
　　
　　茶多酚中儿茶素类化合物的检测方法多为液相色谱法， 如GB/T 8313—2018,高效液相色检测方法分析时间较长， 试剂消耗量较大。本研究在此基础上，利用超高效液相色谱 法建立了同时测定7种儿茶素茶多酚定量方法，方法分析速 度快，操作简单，可用于茶叶中儿茶素类的测定。
　　
　　1材料与方法
　　
　　1.1仪器与设备
　　
　　LC30A超高效液相色谱仪（日本岛津公司）、MS3涡旋 震荡器（德国IKA公司）、Allegra64R低温高速离心机（美 国贝克曼公司）、ME204电子天平（瑞士梅特勒公司）。
　　
　　1.2材料与试剤
　　
　　乙睛、甲醇（HPLC级，美国天地），甲酸（HPLC级， 阿拉丁），水（实验室自制超纯水）。对照品：没食子酸、表 没食子儿茶素、儿茶素、咖啡碱、表儿茶素、表没食子儿茶 素没食子酸酯、表儿茶素没食子酸酯（纯度>98%，北京坛 墨质检）
　　
　　1.3实验方法
　　
　　1.3.1标准溶液的制备
　　
　　混合标准溶液：准确称取各标准物50 mg,混合后用甲 醇溶解稀释定容至50 mL,配制成浓度为l.OOmg/mL的混 合标准储备液；分别取1 .OmL、2.0 mL、5.0 mL、8.0 mL 和10.0 mL储备液用甲醇稀释定容至100 mL,配制成浓度 为 10.0 ng/mL> 20.0 ng/mL、50.0 p.g/mL> 80.00 ng/mL 和 100.0 ng/mL系列混合标准工作液。
　　
　　1.3.2样品处理
　　
　　称取约0.2 g（0.000 1 g）茶叶样品于10 mL离心管中，加 入5 mL 70%甲醇，40 °C下超声提取30 min（每间隔10 min 涡旋1 min） , 8 000 r/min离心5 min,重复提取1次，合并 两次溶液于10 mL容量瓶，混匀后吸取l.OOmL用水1 ： 1 稀释后过0.22 gm尼龙滤膜，液相色谱测定。
　　
　　1.4色谱条件
　　
　　色谱柱：Shim-pack XR-ODS HI（2 mm><75 mm, 1.6 pm）； 流速：0.5 mL/min；进样量5 gL,柱温40 °C；流动相A： 0.1%甲酸乙腊溶液，流动相B： 0.1%甲酸水溶液；洗脱程序 （A） : 0 ~ 1 min, 5% 升至 95%, 4.5 min 维持 95%； 7.0 min 降至70%维持至8 min；检测波长：280 nm；检测器釆集频 率：100 ms；外标法定量。
　　
　　2结果与分析
　　
　　2.1洗脱程序优化
　　
　　本文釆用的超高效液相色谱法测定茶叶中儿茶素类和咖 啡碱，色谱峰较窄，为获得较高的重复性，设定的紫外检测 器检测频率为100 ms,进样量5 hL,以保证的每个峰的釆 集点数多于20个，且峰较窄，更有利于分离；乙腊和甲醇 相比较，乙睛能有效的降低柱压，得到更窄的色谱峰，响应 强度更高，有利于提升检测灵敏度，能较好的分离7种化合 物，分析时间小于8 mm,色谱图如图1所示。
　　
　　2.2标准曲线及定量限
　　
　　按照确定的样品预处理方法和液相检测条件，依次测 定浓度 10.0 mg/L> 20.0 mg/L> 50.0 mg/L、80.00 mg/L 和 100.0 mg/L,混合标准系列工作溶液，得到线性回归方程， 线性关系良好。以20 mg/L浓度的混标标准品溶液进行液相 分析，以各目标峰的信噪比（SIN 2 3）分别确认7种儿茶素 的检出限，如表1表示。
　　
　　2.3准确度和精密度
　　
　　选择样品测定6次，计算目标物含量后，于0.2 g样品 中加入0.2 mL 100 mg/mL,按确定的方法进行处理(”=6), 计算加标回收率和精密度，见表2。
　　
　　3结论本研究基于超高效液相色谱法建立了一种处理简单、快 速、准确定量分析茶叶中没食子酸、表没食子儿茶素、儿茶 素、咖啡碱、表儿茶素、表没食子儿茶素没食子酸酯和表儿 茶素没食子酸酯7种茶多酚方法，与GB/T 8313—2018相比, 优化了色谱条件，提高了检测灵敏度，缩短了检测分析时间。
　　
　　结果显示，本方法可以在8 min内完成7种茶多酚的检 测，具有良好的准确度和精密度，在10〜100mg/L范围内， 信号响应值呈现良好的线性关系,线性相关系数大于0.999, 检出限为6.1〜97.8 mg/kg,加标回收率93.1%〜96.8%, 相对标准偏差在1.7〜3.3%o
　　
　　参考文献
　　
　　[1]王丽丽，林清霞，宋振硕，等.分光光度法测定茶叶 中总黄酮含量[J],茶叶学报,2021,62⑴:1-6.
　　
　　[2]王奕霏，王珊姗，陈丰，等.高效液相色谱法测定茶 叶中有效成分含量的方法综述[J],化工设计通讯,2020,46(6): 156-158.
　　
　　[3]林清霞，王丽丽，杨军国，等.基于DPPH法的茶叶 儿茶素类抗氧化谱效关系研究[J],福建农业学报,2020,35(2): 210-216.
　　
　　[4]白亚欣，侯彩云.几种茶叶生化成分及其抗氧化活性 分析[J],中国食物与营养,2020,26(1):31-36.
　　
　　[5]张建勇，王伟伟，王蔚，等.茶多酚■保健及药理功能 的应用[J],中国茶叶,2020,42(12):9-15.
　　
　　[6]王芬，裴会敏，陈志，等.茶多酚■功能及代谢机理研 究进展[J].现代食品,2020(14):21-22.
食品安全新动向讲座：权威解读食品安全中的过敏原问题

食品安全新动向

 食品产品责任纠纷案件如何应诉？

食品产品责任纠

 同心同德谋良策，群策群力促发展

同心同德谋良策

 舞钢市市场监管局全力保障首届采茶节食品安全

舞钢市市场监管

 【食安直播课】食品掺假与成分检测网络论坛3月25日开讲！免费报名

【食安直播课】

 《食品安全最佳实践白皮书（2020年）》发布

《食品安全最佳

热点推荐