反相高效液相色谱法测定食品中的甜蜜素

　　关键词∶甜蜜素;衍生;液相色谱

　　甜蜜素，化学名为环己基氨基磺酸钠，是一种应用广泛 的食品添加剂叫 我国国家标准《食品安全国家标准食品 添加剂使用标准》(GB 2760—2014) [2]中对甜蜜素的添加 种类、添加量做了规定，但市场上超量、超范围使用甜蜜素 的情况经常发生。目前《食品安全国家标准食品中环己基 氨基磺酸钠的测定》(GB 5009.97—2016) [3]的检测方法主 要是液质串联质谱法、气相色谱法和液相色谱法。本文在酸 性条件下对样品进行提取，利用次氯酸钠衍生将甜蜜素转化 为N, N-二氯环己烷，以正庚烷萃取后用高效液相色谱法 测定，减少了干扰，方法简单、快速、检出限低。

　　

　　1材料与方法

　　

　　1.1仪器与试剂

　　

　　仪器：岛津LC-20AT高效液相色谱仪配二极管阵列 (PDA)检测器；分析天平；恒温水浴锅；离心机；0.22呻 针头微孔滤膜过滤器；超声波振荡器；艾杰尔ASB-C18色 谱柱：250 mmx4.6 mm, 5.0 pm。

　　

　　试剂：甜蜜素标准品(10tng/mL)；硫酸、次氯酸钠、 盐酸、碳酸氢钠为分析纯试剂；乙腊、正庚烷、甲醇为色 谱纯试剂；水为超纯水。

　　

　　1.2供试样品

　　

　　面包，购自超市。

　　

　　1.3色谱条件

　　

　　LC检测器为PDA；实验过程釆用乙腊+水(70%+30%) 以1.0 mL/min的流速洗脱；色谱柱为艾杰尔ASB-C18 (250mmx4.6mm, 5.0)xm)；在波长为 314 nm、柱温为 40 °C 的条件下进样；进样量为10pL。

　　

　　1.4标准溶液的制备

　　

　　准确移取浓度为10 mg/mL的标准物质溶液1.0 mL,用 水定容至10 mL配制成甜蜜素标准储备液1 000 ng/mLo

　　

　　甜蜜素标准曲线的制备，准确移取甜蜜素标准中间液 0.10 mL, 0.20 mL、0.50 mL、0.80 mL 和 1.0 mL 于 10 mL 容量瓶中制成浓度为 1.0 mg/L、2.0 mg/L, 5.0 mg/L、8.0 mg/L 和10 mg/L的标准使用溶液，用于衍生后，测定。

　　

　　1.5标准曲线工作液的衍生

　　

　　将制备好的标准曲线工作液10 mL进行衍生。先加入5% 次氯酸钠溶液2.0 mL后，再加入正庚烷6.0 mL,硫酸溶液 3.0 mL,涡旋混句静止后待分层，除去水层，在正庚烷层加 入5%碳酸氢钠溶液25 mL,涡旋混匀静止取上层经有机滤 膜(0.22 pm)过滤，上机检测。

　　

　　1.6样品的提取

　　

　　称取5 g样品(精确到0.01 g)于塑料离心管中，准确加 入25mL 0.1 mol/L的HCL溶液，超声30 min后加入5 mL 正己烷剧烈振荡用于除去样品中的油脂，5 000 r/min离心 5 min,取出水层后备用。

　　

　　1.7样品的衍生

　　

　　取样品10 mL,制备后按照标准曲线衍生方法进行同样 操作。涡旋混匀静止取上层经有机滤膜(0.22 pm)过滤，上 机检测。

　　

　　2结果与分析

　　

　　2.1提取溶液的选择

　　

　　直接用水提取会提取和目标物相似的结构化合物，衍生 后会出现杂乱峰影响判断。实验发现酸化水溶液和正己烷的 混合溶液提取效果最好，部分样品内含有油脂，在提取样品 的过程中会产生油脂包裹化合物的情况。以面包样品为基质 添加水平为2.5 mg/kg的标准溶液进行实验，不同溶剂的回 收率差异见表1。

　　2.2色谱条件的选择

　　

　　将甜蜜素的衍生物标准溶液在紫外分光光度计上 200〜350 nm的范围内进行扫描测定，综合考虑吸收峰值、 干扰峰等因素，最终选取检测波长为314皿。此峰值基线 稳定、吸收值高且峰型满意。

　　

　　流动相的选择，比较了不同比例的甲醇：水(85%+15%,

　　

　　V: V)、乙腊：水(90%+10%,V : V)、甲醇:水(70%+30%,

　　

　　V： V)、乙精：水(70%+30%, V ： V),发现乙睛:水 (70%+30%, V : V)杂质干扰小，基线处于平稳的状态。 经液相色谱分离后，甜蜜素的衍生物N,N-二氯环己胺能得

　　

　　到良好的分离，保留时间为6.895 min,峰形满意。如图1 所示。