酪蛋白检测方法的分析与研究

2021-05-24 11:29:45 来源: 食品安全导刊

　　酪蛋白检测方法的分析与研究

　　分析与研究GB31638-2016酪蛋白的检测方法，以降低检测成本和缩短检测时间，提高工作效率。方法：对膜分离酪蛋白的检测方法进行了探讨，依据对具体检测步骤的剖析，溶解样品采用旋涡振荡仪、器皿选择50 mL锥形瓶和直径为9 cm滤纸过滤沉淀等方法操作节约成本和提高检测效率。结果：改变溶解样品采用手摇操作方式、选择合适器皿及滤纸等，此法涉及药品种类少，检测效率高，对于检测收集沉淀量较小的样品，有较高的优势。结论：此法操作便捷，工作效率高，精密度好，在实际的检测工作中，可以辅助使用。

　　酪蛋白[1]是一种含有磷钙的结合蛋白，对酸敏感，pH值较低时会沉淀，这种蛋白质主要存在哺乳动物中，是哺乳动物的主要蛋白质，可以降低蛋白质的降解率以及氨基酸的氧化率，从而加大蛋白质的身体吸收和利用率。酪蛋白对幼儿既是氨基酸的来源，也是钙和磷的来源，酪蛋白在胃中形成凝乳以便消化。因此市场中也有很多酪蛋白产品，比如酪蛋白磷酸钛、酪蛋白钙都是以酪蛋白为主要成分的营养品[2]，对人体的营养效果也是非常的好。不仅如此，鉴于这种缓释特性，酪蛋白还会让你有持续的饱腹感，这样就是为什么健身减肥的人食用酪蛋白后减肥效果更加明显。

　　酪蛋白是以乳和/或乳制品为原料,经酸法或酶法或膜分离工艺制得的产品[3]，它是由α、β、κ和r及其亚型组成的混合物,对酸敏感，pH值较低时会沉淀。以乳及乳制品为原料，经脱脂、膜分离酪蛋白，再经浓缩、杀菌、干燥等工艺制得的产品即为膜分离酪蛋白[4]。本文主要对膜分离酪蛋白的测定方法进行研究。

　　由于每位实验操作者的理解认知不同，在进行GB31638-2016酪蛋白测定时，检测者无法快速检测酪蛋白。基于此，笔者综述实验过程中的问题，探讨更为方便的检测新方法。通过对膜分离酪蛋白的具体检测步骤的分析，溶解样品采用旋涡振荡仪和直径为9cm滤纸过滤沉淀等方法操作节约时间，提高检测效率。

　　材料与方法

　　材料与仪器

　　材料与试剂

　　硫酸标准溶液（0.05 mol/L）、氢氧化钠溶液（400 g/L）、硼酸溶液（20 g/L）、甲基红乙醇溶液（（1 g/L））、溴甲酚绿乙醇溶液（（1 g/L））、乙酸钠溶液（1 mol/L）、10%乙酸溶液

　　主要仪器设备

　　定氮仪：Kjeltec8100、电子天平：AL204、旋涡振荡器

　　方法

　　称取0.2克试样移入干燥的150mL具塞锥形瓶中，加入8 mL水混匀后置于65-67 ℃的水浴上使其完全溶解（每隔5分钟轻轻振摇一次，一般为10-15分钟）。冷却后再加入乙酸溶液1 mL，混匀，静置5分钟，再添加乙酸钠溶液1 mL，混匀，静置，使酪蛋白沉淀[5]，用干滤纸过滤。用缓冲溶液少量多次反复洗涤锥形瓶及沉淀，将滤纸连同沉淀物折叠，置于消化管内进行消化，余下步骤GB5009.5-2016操作。

　　研究新方法的实验步骤与分析

　　样品的溶解

　　酪蛋白难溶于水，常温下不易被混匀。称取0.2克试样（精确至0.001克）移入干燥洁净的50 mL锥形瓶中，加入8 mL水于漩涡振荡振荡器2000转/min 旋涡1 min左右封口后置于65-67 ℃的水浴锅使其完全溶解（每隔1分钟轻轻振摇一次，一般为2-3分钟）。

　　沉淀物的转移

　　国标检测方法中步骤是用缓冲溶液少量多次反复洗涤锥形瓶及沉淀，将滤纸连同沉淀物折叠，置于消化管内进行消化。实际操作时需要大量时间冲洗沉淀物也很难处理干净，经过反复实验得到结论：借助外物转移沉淀即为增加一根适中长度的玻璃棒作为辅助工具，能快速、彻底地转移沉淀物。

　　滤纸的选择和硫酸的加入量控制

　　消化不完全是消化完毕颜色出现黑色的主要原因。导致消化不完全的影响因素有：消化温度低；消化时间不够等。本次研究新方法主要针对在消化时间、消化温度、硫酸钾和硫酸铜用量等满足要求的条件下，进行滤纸的选用的解析。

　　滤纸大小对消化颜色的影响

　　滤纸的选择国标检测方法中没有具体要求，因此选择较小且能达到过滤效果的滤纸能节省检测药品（硫酸铜、硫酸钾、浓硫酸和硫酸标准溶液）的用量，同时能更有效地解决了因催化剂、浓硫酸等用量小造成消化完毕的样品颜色发黑无法继续检测的问题。新方法选择不同滤纸在消耗的硫酸用量一定情况下对消化完毕颜色的变化进行实验，颜色深浅量越低表示越接近正常（浅蓝色）颜色，其中滤纸直径为9cm时是最佳选择。

　　关键步骤检测样品时间

　　针对酪蛋白具体检测时间分别依据国标方法和本次研究的新方法各做了6组数据（表1），其中新方法中混匀样品时间、水浴时间溶解消耗、转移沉淀消耗时间都明显减少很多。

　　根据表1可以看出：进行消化前处理样品消耗总时间新方法明显低于国标方法。

　　不同人员间对比

　　分别取3个不同的酪蛋白样品，不同检测人员在同一检测条件下，分别对不同样品进行检测,检测结果的相对偏差均小于国标要求偏差范围（10%），人员间对比结果偏差较小，准确性可靠。

　　重复性

　　取同一个样品进行检测，重复性检测次数为10次，结果分别是：84.5 84.9 84.7 85.3 84.8 86.0 85.7 86.0 84.8 85.7（g/100g）相对偏差百分比分别是：0.08 0.04 0.06 0.01 0.05 0.09 0.06 0.09 0.05 0.06。精密度的检测：取同一批次样品结果，对酪蛋白进行计算，精密度较高如（表1）。

　　结论

　　本文对膜法酪蛋白的检测方法进行了探讨，依据对具体检测步骤的分析，在明确清晰的操作过程中达到节省药品、时间，为检验者指明方向。此法涉及药品种类少，检测效率高，对于检测收集沉淀量较小的样品，有较高的优势。此法操作便捷，准确度高，精密度好，在实际的检测工作中，可以辅助使用。

　　参考文献

　　[1]李晓晖. 牛乳中酪蛋白的结构特性及其应用[J]. 食品工业, 2002, 023(001):29-31.

　　[2]吴斌.酪蛋白和乳糖的营养价值及提取方法[J].世界最新医学信息文摘（连续型电子期刊）.2015,(23).256-256

　　[3]张建忠, 郦一心. 酪蛋白和酪蛋白制品的开发[J]. 中国乳品工业, 1998，26(6):31-32.

　　[4]姚强, 史宏, 杨刚,等. 酪蛋白的聚集态及其膜分离[J]. 南京工业大学学报(自然科学版), 2012(06):102-105.

　　[5]苏丽. pH 值对牛乳中酪蛋白提取收率的影响[J]. 2015.

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