山东省家禽产品兽药残留情况调查分析

    为了解山东地区市售家禽产品中兽药残留现状，为山东省食品安全保障提供有效信息，本次调查选取了山东省泰安市、青岛市、聊城市、临沂市、潍坊市5个城市的大型超市和农贸市场为采样点，利用酶联免疫试剂盒对采集的324份鸡肉、鸭肉样本中的四环素类、氯霉素、金刚烷胺、喹诺酮类等兽药残留进行筛查，并根据《动物性食品中兽药最高残留限量》对检测结果进行判定。结果显示，检测的324份样本的兽药残留检出率为5.56%，其中超标率为2.47%，4类药物均有检出，氯霉素药物残留现象最明显，超标率为1.85%；鸭胸肉检出率最高（7.41%），鸡腿肉超标率最高（4.00%）；临沂市检出率最高，达到9.84%，潍坊市超标率最高，达到5.56%。经统计，农贸市场的检出率和超标率显著高于大型超市。通过对试剂盒灵敏度、准确度和精密度以及检出样本确证结果验证发现，试剂盒检测结果准确，与国标方法检测结果一致。通过本次调查可以看出，山东省家禽产品兽药残留现象依旧存在，需要加强对家禽产品兽残的监测与管理，酶联免疫试剂盒具有较高的准确度，操作方法比仪器方法便捷，推荐作为初筛手段用于大批量家禽产品兽药残留现场快速检测。
前言
    山东省是家禽饲养大省，肉鸡、肉鸭、蛋类总产量约占全国的15%，家禽产品出口量占全国的60%以上。国家统计局相关数据显示，2016年山东全省家禽存栏量达到6.57亿只，禽蛋产量达440.6万吨，分别比2015年增长了6.8%和3.9%。在2016年5月发布的《山东省家禽业转型升级实施方案》中提到，计划到2020年山东省禽肉产量达到285万吨。
    随着家禽养殖业的迅速发展，在养殖过程中任意加大用药剂量和疗程，不遵守休药期违规用药现象已屡见不鲜。2012年爆发的“速成鸡”、“药鸡门”事件以及2013年爆发的禽流感等，都给山东的家禽养殖业造成了不小的打击，在山东省食药监局近期公布的食品抽检信息中，有5批次鸡肉被检出禁用药物或药物残留超标，其中检出强力霉素超标达10倍之多。家禽产品中残留的药物，经食物链的作用会在人体内富集，从而对人类健康造成严重危害。家禽产品质量安全不仅事关人民健康，对山东省家禽养殖业的可持续发展以及家禽产品的国际竞争力均有影响。因此，深入了解山东省家禽产品中兽药残留现状，对提升该省家禽产品兽药残留的监控力度具有现实的指导意义。加强家禽养殖户规范兽药使用和兽药残留控制，提高家禽产品品质，对保证居民吃上“放心禽肉”、“放心蛋”极为重要。
本研究面向山东省5大城市，以鸡肉、鸭肉等家禽产品为研究对象，针对四环素类、氯霉素、金刚烷胺、喹诺酮类等兽药，分析不同种类药物残留情况、不同动物及组织的残留量等数据。该研究有助于山东省食品安全管理部门了解 兽药残留种类、评估动物源性食品的质量安全水平，提高消费者的食品安全意识。
1材料与方法
    1.1 材料与试剂
    乙腈（色谱纯，国药集团化学试剂有限公司），乙酸乙酯（分析纯，天津市富宇精细化工有限公司），正己烷（分析纯，天津市富宇精细化工有限公司），水（符合GB/T 6682-2008规定的二级水），四环素类药物标准品（美国Sigma公司），氯霉素标准品（美国Sigma公司），金刚烷胺标准品（美国Sigma公司），喹诺酮类药物标准品（美国Sigma公司）。
    四环素类酶联免疫试剂盒、氯霉素酶联免疫试剂盒、金刚烷胺酶联免疫试剂盒及喹诺酮类酶联免疫试剂盒由北京维德维康生物技术有限公司提供。
    1.2仪器
    BILON-WX08型高速电动匀浆机（上海比朗仪器制造有限公司）；电子天平ER-182A（日本A＆D公司）；HQ-60型恒温振荡仪（北京方正生物科技发展有限公司）；TDL-40C型高速离心机（上海安亭科学仪器厂）；GM-2100型氮气吹干仪（日本 EYELA公司）；Thremo-F2型微量移液器（美国Thermo）；TSQ Quantum Ultra液相色谱质谱联用仪（美国Thermo）。
    1.3样本收集
    2017年1~3月，选择山东省泰安市、青岛市、聊城市、临沂市、潍坊市5个主要城市作为采样区域，每个城市内随机选择2个人口较为集中的居民区，从每个居民区周边随机选择采购频率较高的超市和农贸市场各1个作为采样点。根据山东省当地居民日常饮食习惯，分别采购鸡肉类（鸡胸、鸡腿）、鸭肉类（鸭胸、鸭腿）两类4种家禽产品。20个采样点共采集样本324份，其中，鸡胸85份、鸡腿75份、鸭胸81份、鸭腿83份；泰安市采样70份、青岛市采样75份、聊城市采样64份、临沂市采样61份、潍坊市采样54份。     1.4方法
    1.4.1 酶联免疫快速检测试剂盒检测：利用酶联免疫试剂盒对收集的324份家禽产品样本中的四环素类、氯霉素、金刚烷胺、喹诺酮类的残留含量进行初筛，分别按照四环素类酶联免疫试剂盒、氯霉素酶联免疫试剂盒、金刚烷胺酶联免疫试剂盒及喹诺酮类酶联免疫试剂盒说明书规范检测。
    经酶联免疫快速检测试剂盒初筛后，高于最大残留限量（MRL）的样本利用国家标准检测方法规定的液相色谱串联质谱法（LC-MS/MS）进行确证。
    1.4.2 液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）检测：对酶联免疫分析方法检出阳性的样本，参考国家标准方法GB/T 22338-2008《动物源性食品中氯霉素类药物残留量测定》、GB/T 21317-2007《动物源性食品中四环素类兽药残留量检测方法 液相色谱-质谱/质谱法与高效液相色谱法》、GB/T 21312-2007《动物源性食品中14种喹诺酮药物残留检测方法 液相色谱-质谱/质谱法》、DB32/T 1163-2007《鸡肝中金刚烷胺残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》进行检测确证。
    1.4.3 评判依据：统计检测结果后，将结果与农业部235号公告《动物性食品中兽药最高残留限量》规定的最大残留限量进行比较，判断样本兽药残留是否超标。其中，国家禁止在动物性食品中使用的药物，一旦被检出，即判为超标；对于国家在动物性食品中限量使用的药物，当检测结果高于其MRL时，判为超标。
样本的检出率和超标率计算公式分别为（1）、（2）。
    检出率： p1=含有某种（类）兽药的动物性食品检出个数/检测动物性食品总数×100% ··············（1）。
    超标率：p2=含有某种（类）兽药的动物性食品超标个数/检测动物性食品总数×100% ··············（2）。
    1.4.4 统计分析：采用SPSS 19.0系统软件对样本数据进行统计和显著性分析，p＜0.05为差异有统计学意义。
2结果与分析
    2.1家禽产品兽药残留检出情况分析
    在收集的324份家禽产品样本中，有18份样本检出兽药残留，检出率为5.56%，其中有8份样本检测结果超标，超标率为2.47%。这说明家禽产品兽药残留现象依旧存在，需要继续加强对家禽产品质量安全的监管与检测。
    2.2 兽药残留种类分析
    据统计，四环素类、氯霉素、金刚烷胺、喹诺酮类4种药物均有残留检出，其中氯霉素检出率最高，达到1.85%，这可能与氯霉素在环境中易残留，且方法灵敏度高有关。四环素类和喹诺酮类药物虽有残留检出，但是并未超过MRL，表明在动物饲养过程中饲喂了四环素类和喹诺酮类药物，可能屠宰时并未严格遵循休药期规定，导致药物代谢不完全，存在药物残留。     2.3不同组织样本中各药物的检出情况
    分别对鸡胸肉、鸡腿肉、鸭胸肉、鸭腿肉的药物残留情况进行分析，结果发现，鸭胸肉中的四环素类药物检出率最高，达到3.70%；鸡腿肉中氯霉素超标率最高，达到2.67%；鸡胸肉、鸡腿肉、鸭胸肉、鸭腿肉4种样本药物残留基本一致，说明这4种药物在鸡胸肉、鸡腿肉、鸭胸肉、鸭腿肉中的残留代谢情况相似。     2.4 不同采样地区药物检出情况分析
    结果显示，山东省泰安市、青岛市、聊城市、临沂市、潍坊市5个采样区域均有兽残检出、超标现象，其中临沂市兽残检出率最高，达到9.84%；潍坊市样本超标率最高，达到5.56%。     2.5 样本来源药物检测情况分析
    结果显示，超市出售的鸡肉、鸭肉兽药检出率明显低于农贸市场的检出率，兽残超标样本均来自于农贸市场。由此可见，超市出售的动物性食品兽药残留情况要优于农贸市场出售的动物性食品，因此，本研究建议购买动物性食品应尽可能到正规超市。      2.6 酶联免疫试剂盒灵敏度验证
    为保障检测结果的准确性，对检测所用酶联免疫试剂盒的灵敏度、准确度和精密度进行验证。同时，与仪器方法在检出样本中的检测值比较，验证试剂盒的实用性。
    2.6.1 检出限验证：通常以检出限（Limit Of Detection，LOD）作为灵敏度的验证指标，利用20份空白鸡肉类（鸡胸、鸡腿）、鸭肉类（鸭胸、鸭腿）样本，验证四环素类、氯霉素、金刚烷胺、喹诺酮类4种药物试剂盒的检出限。检出限计算公式为平均值加3倍标准差。由表6可知，氯霉素、四环素类、金刚烷胺、喹诺酮类4种药物在家禽产品样品的检出限分别约为：0.1、3.0、0.5、2.0μg/kg，达到国家限量要求，部分检出限优于LC-MS/MS方法。     2.6.2 准确度和精密度验证：在空白样本中分别添加1、2、4倍检出限的四环素类、氯霉素、金刚烷胺、喹诺酮类药物标准品溶液，每个添加量样品重复实验10次，并且连续3d重复实验，分别计算每个样本的检测值、平均回收率和批内、批间的相对标准偏差。由表7可知，四环素类、氯霉素、金刚烷胺、喹诺酮类4种药物在家禽产品样品的平均添加回收率为67%~110%；批内、批间相对标准偏差（RSD）均小于15%，说明酶联免疫试剂盒的准确度良好、精密度高。     2.6.3 与国家标准方法比较：对酶联免疫试剂盒检出的样本进行对应的国家标准方法验证，结果显示，两种方法检测结果一致，显著性差异分析显示，P值为0.102(P＞0.05)，说明两种方法的检测结果无显著性差异，进一步证实了酶联免疫试剂盒的准确性。此外，与LC-MS/MS相比，酶联免疫试剂盒反应迅速，操作简单，便于在现场大批量样本检测中推广。 2.7 讨论
    经调查发现，山东省家禽产品兽药残留现象依旧存在，有必要加强对家禽产品兽残的检测管理。酶联免疫试剂盒具有较高的准确度，推荐作为初筛手段用于大批量家禽产品兽药残留的现场快速检测。
    导致兽药残留的原因是多方面的，可能与家禽饲养过程中滥用药物或休药期违规屠宰有关。由于家禽产品在居民膳食中所占比例较大，应当提高警惕。相关部门应加强对兽药使用的监管力度，加强源头监管，严格规范兽药的安全生产和使用，确保畜产品的质量安全。同时，应与时俱进改进检验技术，加强检测体系的建设，提高基层单位的兽药残留检测能力，扩大检测范围，将残留危害降低到最小程度。