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测试片方法快速检测活性乳酸菌饮料中的乳酸菌总数

2020-04-27 15:37:24 来源: 食品安全导刊

  测试片方法快速检测活性乳酸菌饮料中的乳酸菌总数
  
  作者简介:霍建伟(1983-),男,工程师,从事食品微生物检测及食品安全质量控制工作。
  
  摘要: 国标乳酸菌检测方法中,对于仅含乳杆菌类的检测,需要3天的时间,且需要在厌氧环境中培养,3M乳酸菌测试片方法,测试片自带厌氧环境,可在正常有氧环境下培养,检测时间2天,提高检测效率,本文针对活性乳酸菌饮料(仅含乳杆菌类)在乳酸菌检测时,对2种方法进行了一致性比较,为企业更好的应用该产品提供有效数据。
  
  关键词:测试片方法,乳酸菌检测,提高效率
  
  0引言
  
  活性乳酸菌饮料(仅包含乳杆菌类)含有大量的乳酸菌,一般出厂时乳酸菌含量大于107 CFU/ml, 目前国标的检测方法是GB 4789.35-2016乳酸菌检测, 对于乳杆菌类的检测,需要厌氧培养,72小时出具结果,企业多数采用的是厌氧罐加厌氧袋加厌氧指示剂的方式,为厌氧培养提供条件。
  
  3M 乳酸菌测试片是一种即用型培养基系统,测试片含有氧气清除的成分,使其能够自带厌氧环境,可直接在培养箱中培养,无需厌氧罐等辅助设备,且可以在48小时出具结果。
  
  本文对2种方法进行比较,通过大量实验数据表明2种方法的一致性,并且3M 乳酸菌测试片方法能提高效率和快速出具检测结果。
  
  1 实验
  
  1.1材料、试剂和仪器
  
  活性乳酸菌饮料(仅包含乳杆菌类),市场购买。
  
  恒温培养箱:36 ℃±1 ℃;天平:感量为0.1 g;均质器;无菌吸管:1 mL(具0.01 mL 刻度)、10 mL(具0.1 mL 刻度)或微量移液器及吸头;无菌锥形瓶:容量250 mL、500 mL;无菌培养皿:直径90 mm; 3MTM PetrifilmTM乳酸菌测试片;厌氧罐;厌氧剂;厌氧指示剂,MRS琼脂培养基。
  
  1.2方法:
  
  1.2.1 样品的处理
  
  样品应先将其充分摇匀后,以无菌吸管吸取样品25 mL 放入装有225 mL生理盐水(提前灭菌)的无菌锥形瓶中,充分振摇,制成1:10 的样品匀液。用1 mL微量移液器吸取1:10 样品匀液1 mL,沿管壁缓慢注于装有9 mL 生理盐水的无菌试管中,制成1:100 的样品匀液。 按上述操作顺序,依次稀释至10-6,10-7,10-8。
  
  1.2.2  GB 4789.35-2016乳酸菌检验方法
  
  GB 4789.35-2016乳酸菌检验中6.2.3.4 乳杆菌计数要求,根据待检样品活菌总数的估计,选10-7,10-8适宜稀释度,每个稀释度吸取1mL样液到平皿内,每个稀释度做两个平皿。稀释液移入平皿后,将冷却至48 ℃的MRS琼脂培养基,倾注入平皿约15mL,转动平皿使混合均匀。36℃±1℃厌氧培养72h±2h。从样品稀释到平板倾注要求在15min内完成。
  
  1.2.3  3M乳酸菌测试片方法
  
  将上述对应稀释度的样品,吸取1mL,揭开测试片上层膜,垂直加到测试片中央,将上层膜缓慢盖下,避免气泡产生,切勿使上层膜直接落下,将压板放置在上层膜中央处,轻轻地压下,使样液均匀覆盖于圆形的培养面积上,切勿扭转或滑动压板,拿起压板,静置至少1min以使培养基凝固,每个稀释度做两个测试片。将测试片的透明面朝上置于培养箱内,堆叠片数不超过20片,36℃±1℃下需氧培养48h±2h。
  
  2实验结果与分析
  
  2.1实验结果见表1
  
  2.2结果分析
  
  2.2.1  Log差值分析方法:
  
  统计2种检测结果Log值差值的平均值,经计算两种方法的log差值平均值的绝对值为0.08,小于0.50,表明本次实验中3M乳酸菌测试片方法和GB4789.35-2016方法有很好的一致性。(见表2)
  
  2.2.2 配对t检验分析方法
  
  以上检测结果的配对t检验,P值是0.075,P值大于0.05,表明本次实验中3M乳酸菌测试片方法和GB4789.35-2016方法的结果没有统计学上的差异。
  
  2.2.3结论
  
  本次实验表明,针对活性乳酸菌饮料(仅含乳杆菌类)的乳酸菌检测,3M乳酸菌测试片方法和GB4789.35-2016乳酸菌检测方法,无显著性差异,一致性很好。
  
  测试片方法操作简单,自带厌氧环境,无需厌氧罐和厌氧试剂等设备及耗材,提高了检测效率,检测时间为48h,相比传统GB方法,能在更短时间内获得样品的检测结果。
  
  参考文献:
  
  [1] GB 4789.35-2016 《食品安全国家标准 食品微生物检验 乳酸菌检验》
  
  [2]SN/T 2775-2011 《商品化食品检测试剂盒评价方法》
  
  [3]ISO 16140-2:2016 Microbiology of the food chain – Method validation –Part 2: Protocol for the validation of alternative(proprietary) methods against a reference method
  
  [4]AOAC 041701 3MTM PetrifilmTM Lactic Acid Bacteria Count Plate
  
  霍建伟
  
  3M中国有限公司 北京技术中心 北京 100176

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