动物性食品中氯霉素残留量检测方法简化及分析

摘　要：连续两年在市场、餐饮业随机抽取150份动物性食品进行氯霉素检测，采用高效液相色谱串联三重四极杆质谱（LC-MS-MS）测定，比较与综合了检测方法GB/T 22338、农业部781号公告-2-2006及GB/T 20756。对操作步骤进行简化，同时提高检测时效，该方法的检出限为0.07μg/kg，线性范围为0.5~100ng/mL（r=0.99993），回收率达99%，相对标准偏差RSD为2.6%。两年内检测结果显示仍存在使用氯霉素现象，共有5批样品检测出氯霉素，不合格率达3.3%，为确保餐饮业中动物性食品的安全，需加强兽药残留的监管，抵制动物性食品中抗生素的滥用。
关键词：动物性食品   氯霉素   检测

1 引言
    氯霉素能使白细胞减少，对人体造血系统的毒性极大，特别是会杀伤颗粒性白细胞，从而影响红细胞的成熟，并容易引起再生障碍性贫血症，可损害视力，引起急性中毒性表皮松懈症，使眼睑粘连及产生角膜瘢痕。此外，氯霉素对老年人、新生儿、早产儿以及肝肾功能不全人群的影响更大^[1]。
    随着经济生活水平的提高，人们对食品的质量要求也随之提高，并逐渐认识到抗生素饲料添加剂在经济效益的背后存在较大弊端。因此，大部分发达国家和地区禁用抗生素，而我国农业部公告第235号《动物性食品中兽药最高残留限量》附录4也规定氯霉素及其盐、酯（包括琥珀氯霉素）在所有动物性食品中是禁止使用的药物，并不得检出^[2]。
 
2 实验
2.1 样品、仪器、标准品及试剂
    2.1.1 样品：购置于市场，分别随机抽取畜禽生肉、水产品、蜂蜜共80批，餐饮业随机抽取熟肉加工制品70批。
    2.1.2 仪器：高效液相色谱串联三重四极杆质谱LC-MS-MS（高效液相色谱，日本岛津公司；质谱，美国AB公司）；色谱柱C18（4.6mm×150mm×5μm，美国安捷伦公司）。
    2.1.3 标准品：标准品名称及来源，见表1。
    2.1.4试剂：实验用水为二次蒸馏水；氯化钠、正己烷、乙腈为分析纯；甲醇、乙酸乙酯为色谱纯。 2.2仪器条件
    2.2.1高效液相色谱条件
    进样量：10μL；柱温：40℃；流速：0.8mL/min，流动相和梯度比例，见表2。     2.2.2质谱条件：
    离子源：ESI；扫描方式：负离子扫描；检测方式：MRM。 2.3 对照品制备与样品处理
    2.3.1 对照品制备
    氯霉素标准工作液：准确量取标准溶液，用甲醇+水（3+7）稀释至刻度，制成浓度为100ng/mL的标准工作溶液。
    氯霉素D-5标准工作液：准确量取内标溶液，用甲醇+水（3+7）稀释至刻度，制成浓度为100ng/mL的内标工作液。
    标准曲线的制备：精密量取上述标准溶液工作液，用基质溶液稀释至1.0mL，制成氯霉素浓度分别为0.5、1.0、5.0、10.0、50.0和100ng/mL，氯霉素D-5内标浓度为20.0ng/mL，氯霉素浓度检出限浓度为0.5ng/mL。
    2.3.2 样品处理
    取试样5.0g置于50mL塑料离心管中，加氯霉素D-5内标工作液200μL，加入乙腈10mL和4％氯化钠溶液10mL，涡旋振荡30min提取。离心10min转速4500r/min，取上清液到新的50mL塑料离心管中。在新的塑料离心管中加正己烷5mL，涡旋振荡3min，4500r/min，离心5min，弃去正己烷液，反复几次直至去除样品中脂肪。加乙酸乙酯溶液6mL，涡旋振荡5min，4500r/min，离心5min，将乙酸乙酯层转移至15mL玻璃离心管中，经氮气吹干，加甲醇+水（3+7）1mL，涡旋5min使之溶解，于12000rpm下离心3min，经0.22μm滤膜过滤，取滤液进样测定。^[3-5]
3 结果
    3.1 质谱条件的优化
    针筒直接进样质谱仪，用全扫描方式将氯霉素和D5-氯霉素的标准溶液注入离子源中，找到目标化合物的分子离子峰。进行二级质谱，扫描二级质谱图（图1）找到碎片离子信息，目标化合物的质谱参数CE电压、DP电压、EP电压等进行优化，达到质谱条件最佳。^[6]     3.2 样品前处理优化
    本实验选用正己烷去除样品中脂肪，乙酸乙酯提取样品中的氯霉素，进行涡旋和离心，氮气吹干。
 
3.3 标准曲线、检出限及回收率
    用标准溶液溶解基质样品来制备标准曲线，绘制标准曲线进行定量，消除基质效应对结果的影响。得曲线方程y=3.44348e⁴ x±10951.42692，相关系数=0.99993，见图2。     本实验的样品称样以5.0ｇ计，定容体积按1mL计，结合标准曲线氯霉素的检出限浓度为0.5ng/mL，仪器测试信噪比如图3所示，本实验检出限为0.07ug/kg。^[7]     称取空白试样后同时分别加入0.03、0.1mL氯霉素标准工作液100ng/mL，各平行5份同样品处理，实际加入标准品的量为0.6、2.0μg/kg，计算见表4。 4 结论
4.1 方法简化
    本实验简化了提取步骤，提高了检测效率；同时优化检测方法，达到最佳检测条件，得到结果为该方法的最低检出限为0.07ug/kg， 灵敏度得到提高，线性范围扩大，为0.5~100ng/mL（r=0.99993），回收率达99%，相对标准偏差RSD为2.6%。满足了对动物性食品氯霉素监督检测的要求，提高了检测时效。
 
4.2 检测数据结果分析
    样品购置于市场，分别随机抽取畜禽生肉，其中牛肉20批、猪肉10批、鸡肉10批、水产品20批、蜂蜜及蜂产品20批，共80批；从餐饮业随机抽取熟肉加工制品共70批，其中牛肉加工制品20批、猪肉加工制品20批、鸡肉加工制品20批、鸭肉加工制品10批。检测结果显示，其中牛肉1批、鸡肉1批、蜂蜜1批、鸡肉加工制品2批检测出氯霉素残留量，共计5批样品不合格，不合格率达3.3%。从上述情况看，氯霉素残留量控制依旧是食品安全重大问题，检出率较高的为鸡肉类样品中氯霉素残留，禽类养殖业中使用氯霉素较为广泛，其他类产品也存在含有氯霉素残留，因此应从源头加强畜禽等养殖业中兽药使用监管，同时在企业生产和餐饮业加工中应注重加工原料的把关。^[8]
参考文献：
    [1] 熊琳，李维红等，肉制品中药物残留风险因子概述[J].食品安全质量检测学报，2016年4月第7卷第4期:1572-1577.
    [2] 农业部235号公告-2002，动物性食品中兽药最高残留限量[S].
    [3] 农业部781号公告-2-2006，动物源食品中氯霉素残留量的测定高效液相色谱-串联质谱法[S].
    [4] GB/T 22338-2008，动物源性食品中氯霉素类药物残留量测定[S].
    [5] SN/T 1864-2008，进出口动物源性食品中氯霉素残留量的检测方法液相色谱-串联质谱法[S].
    [6] 马晓年等，超高效液相色谱串联三重四极杆质谱测定蜂蜜中氯霉素残留[J].食品安全质量检测学报，2017年10月第8卷第10期：3898-3902.
    [7] 张厚森等，高效液相色谱－串联质谱测定熟肉制品中磺胺嘧啶和氯霉素药物残留[J].分析科学学报，2013年8月第29卷第4期：527-530.
    [8] 勇艳华等，熟肉制品中氯霉素的监测与分析[J].粮食加工，2010年09期：154-155.